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本發(fā)明涉及一種綠盲蝽唾液酶中蛋白酶與纖維素酶的體外提取測定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營養(yǎng)法提取綠盲蝽唾液酶，并測定綠盲蝽中蛋白酶與纖維素酶的活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營養(yǎng)介質(zhì)，利用酶與底物反應(yīng)的原理，測定綠盲蝽唾液中蛋白酶、纖維素酶的活性。本方法材料易得，操作簡單方便，制作成本低，占空間小，可實(shí)現(xiàn)綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續(xù)回收利用。

成果描述：酶脫毛是一種公認(rèn)的制革脫毛清潔工藝，在中國的豬皮制革中獲得了成功的應(yīng)用，但一直沒有成功用于牛皮制造。已經(jīng)報(bào)道的牛皮的酶脫毛工藝通常是在35℃至42℃的較高溫度下進(jìn)行，由于組織及纖維結(jié)構(gòu)的差異，較高溫度下牛皮膠原纖維容易受到破壞，容易發(fā)生松面、毛孔擴(kuò)大等質(zhì)量缺陷，甚至導(dǎo)致爛面等嚴(yán)重質(zhì)量事故，并且在該溫度條件下實(shí)施牛皮酶脫毛，工藝操作和控制難度極大。本技術(shù)提供了一種針對牛皮的低溫酶脫毛工藝，并且完全不使用硫化物。該工藝技術(shù)使用與之配套的脫毛酶制劑，能夠在較低溫度下對牛皮進(jìn)行脫毛處理，解決了長久以來本領(lǐng)域技術(shù)人員一直渴望解決但始終未獲得成功的牛皮酶脫毛制革的技術(shù)難題，并且產(chǎn)生的含蛋白廢水可以替代部分氮肥直接用于農(nóng)業(yè)或城市綠化的灌溉，低溫脫毛同時也節(jié)約了能源的消耗，降低了生產(chǎn)成本，提高了綜合效益。市場前景分析：牛皮制革廠。與同類成果相比的優(yōu)勢分析：國際先進(jìn)。

可以量產(chǎn)/n針對當(dāng)前工業(yè)發(fā)展對脂肪酶的大量需求與脂肪酶實(shí)際表達(dá)水平較低 的技術(shù)瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達(dá)技術(shù)關(guān)鍵，建立了真菌脂肪酶高 效表達(dá)技術(shù)平臺，構(gòu)建的米根霉脂肪酶基因工程菌 10L 發(fā)酵酶活力可達(dá) 40,000U/ml 以上，為當(dāng)前報(bào)道的最高水平，具有極強(qiáng)的國際競爭力。產(chǎn) 品可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯，食品加工、烘焙，生物柴油制備，飼料添加 劑，再生紙脫墨等廣泛用途。建設(shè)其發(fā)酵生產(chǎn)線預(yù)計(jì)需要 800-1000 萬元，經(jīng)濟(jì)效益可觀。米根霉脂肪酶可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯，食品加工、烘焙，生物柴油

油脂精煉過程中，脫膠是非常重要的一步工序，脫膠效果的好壞直接影響到油脂精煉的效率和最終產(chǎn)品的質(zhì)量。傳統(tǒng)的脫膠方法常存在產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定、消耗大、得率低、“三廢”排放量大等問題。酶法脫膠工藝是現(xiàn)代工業(yè)生物催化技術(shù)在傳統(tǒng)油脂行業(yè)中的應(yīng)用，是對現(xiàn)有化學(xué)或物理脫膠工藝的改進(jìn)，以提高其經(jīng)濟(jì)性和環(huán)保性，有著廣泛的發(fā)展前景和重要的經(jīng)濟(jì)和社會價(jià)值。本技術(shù)以自行篩選所得菌株BIT-18表達(dá)的磷脂酶為對象，開發(fā)了該磷脂酶在大豆油、菜籽油等常見油脂酶法脫膠中的應(yīng)用，已完成了實(shí)驗(yàn)室工藝優(yōu)化，建立了適于工廠規(guī)模油脂酶法脫膠工藝

糖化酶是糖化工業(yè)的重要酶制劑，但生產(chǎn)上的主要問題是：酶活力低、沒有常溫條件下的酶產(chǎn)品（使得糖化工藝中需要消耗大量能源）。利用定向進(jìn)化技術(shù)獲取較低溫度下活力提高數(shù)倍~數(shù)十倍的新的酶分子、并確定新基因序列，轉(zhuǎn)化受體菌。 我們的技術(shù)優(yōu)勢：基因分離技術(shù)是我們的優(yōu)勢，已報(bào)道全長基因序列15條，在天津基金資助下最近已克隆了糖化酶基因。定向進(jìn)化是我們目前的主要研究方向之一，在留學(xué)回國科研啟動基金資助下對谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶脫氯活性進(jìn)行提高，已有研究進(jìn)展。

全自動酶標(biāo)儀318C+廣泛用于各大高校科研機(jī)構(gòu)、技術(shù)質(zhì)量監(jiān)督局、動植物檢疫及食品飼料行業(yè)等，除開展血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤免疫學(xué)、傳染病免疫學(xué)、TORCH感染免疫學(xué)、基因檢驗(yàn)項(xiàng)目外、還可以對食品安全三聚氰胺、黃曲霉素、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等所有采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Elisa）進(jìn)行項(xiàng)目檢驗(yàn)，并且有相應(yīng)版本的軟件支持。   產(chǎn)品特點(diǎn)： 1、內(nèi)置嵌入式系統(tǒng)，無需外接電腦即可操作、存儲、打印; 2、測量模式：單波長檢測，雙波長檢測，兩點(diǎn)法，動力學(xué)法，酶抑制率，終點(diǎn)法、速率法。 3、*可選擇吸光度、Cut-Off定性計(jì)算、單點(diǎn)定標(biāo)、折線回歸、線性回歸、指數(shù)回歸、對數(shù)回歸、雙對數(shù)回歸、log-logit、冪回歸、四參數(shù)回歸、酶抑制率等計(jì)算方法；  4、在同一板上可進(jìn)行多至12個不同項(xiàng)目的測試，并可同一板檢測定性和定量項(xiàng)目。 5、*全面完善的質(zhì)控功能，包含westguard多規(guī)則質(zhì)控，即刻法質(zhì)控等多種質(zhì)控圖及質(zhì)控參數(shù)計(jì)算，具有質(zhì)控報(bào)警功能。   技術(shù)參數(shù)： 1、*波長范圍： 400-800nm 2、*濾光片配置：10個濾光片位置，標(biāo)配405nm、450nm、492nm、630nm,選配6定制波長 3、吸光度范圍：0.000―4.000A 4、*光通道數(shù)：8通道光路檢測，另設(shè)一個獨(dú)立參比通道（選配） 5、示值穩(wěn)定性：≤±0.002A或≤0.5%T/10min。 6、示值誤差（準(zhǔn)確性）：≤±0.005A或±0.2%T。 7、重復(fù)性：≤0.2%或≤0.2%T。 8、靈敏度：≥0.01（L/mg）。 9、通道差異：≤0.01A。 10、波長示值誤差：±1nm 11、半寬度：≤8nm 12、分辨率：0.001A（顯示），0.0001A（內(nèi)部計(jì)算） 13、*讀板速度：單波長≤3秒/96孔，雙波長≤6秒/96孔 14、振板功能：速度和時間可調(diào) 15、光源類型：進(jìn)口鹵鎢燈 16、板條類型：標(biāo)準(zhǔn)96孔或其他型酶標(biāo)板、條 17、適用孔型：平底、U型和V型 18、顯示方式：7寸彩色液晶顯示屏顯示 19、輸入方式：觸摸屏輸入，可選配鼠標(biāo)和鍵盤 20、打印：內(nèi)置熱敏打印機(jī)，可外接打印機(jī) 21、數(shù)據(jù)儲存：200,000個測試數(shù)據(jù)，500個以上測試項(xiàng)目（可擴(kuò)展） 22、接    口： USB(A)口、USB(B)口、串口、并口 23、使用環(huán)境：溫度5-40℃；濕度15%-80% 24、電源電壓：220V±10%，50/60Hz 25、體積：475mm×350mm×210mm（長×寬×高） 27、重量：11.5Kg

隨著首個RNA修飾N6-甲基腺嘌呤（m6A）的去修飾酶FTO的發(fā)現(xiàn)，RNA表觀遺傳學(xué)/表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)開始興起并成為表觀遺傳學(xué)新的研究熱點(diǎn)。m6A作為首個被發(fā)現(xiàn)的可逆RNA修飾，廣泛存在于mRNA，依賴修飾酶、去修飾酶和結(jié)合蛋白發(fā)揮調(diào)控功能。已發(fā)現(xiàn)m6A具有調(diào)控mRNA剪接、出核、穩(wěn)定性和蛋白翻譯等功能，可以參與發(fā)育、配子發(fā)生、細(xì)胞重編程、生物節(jié)律、疾病等多種生理和病理過程的功能調(diào)控。為了更好地研究m6A生物功能和臨床病理研究，開發(fā)m6A高通量測序技術(shù)一直是研究的熱點(diǎn)。 現(xiàn)有m6A測序技術(shù)主要依賴于m6A抗體富集技術(shù)，包括低分辨率的m6A-seq/MeRIP-seq和聯(lián)用iCLIP或PAR-CLIP技術(shù)的高分辨率m6A測序技術(shù)miCLIP 或PA-m6A-seq。抗體存在對特定RNA序列或結(jié)構(gòu)的潛在非特異性結(jié)合，為了解決抗體方法的種種問題，研究者們做出了各種嘗試，近期開發(fā)了兩類無需抗體的m6A測序技術(shù)，一類為利用對特定甲基化序列（m6ACA）敏感的RNA核酸內(nèi)切酶MazF輔助的測序方法（m6A-REF-seq or MAZTER-seq），此類方法只能檢測16~25%的m6A位點(diǎn)；另一種是在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)融合m6A-binding domain（YTH）與胞嘧啶脫氨酶（APOBEC1）的融合蛋白實(shí)現(xiàn)的m6A測序（DART-seq），但該方法依賴于細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率且受限于體外樣品的使用。 賈桂芳課題組一直致力于開發(fā)和利用核酸化學(xué)生物學(xué)技術(shù)研究RNA化學(xué)修飾在動植物中的生物功能研究。在本課題中，賈桂芳課題組巧妙地利用m6A的去甲基酶FTO蛋白作為催化劑，將mRNA上化學(xué)惰性的m6A轉(zhuǎn)化為高反應(yīng)活性的中間態(tài)產(chǎn)物N6-羥甲基腺嘌呤（hm6A），然后利用二硫蘇糖醇（DTT）的巰基與hm6A發(fā)生亞胺1,2加成反應(yīng)，將不穩(wěn)定的hm6A轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定的巰基加成產(chǎn)物dm6A。dm6A上的自由巰基可以與甲烷硫代磺酸（methanethiosulfonate，MTSEA）快速反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)在mRNA上m6A的位置標(biāo)記生物素Biotin，最終可被鏈霉親和素珠捕獲，從而富集含有m6A修飾的RNA片段供后續(xù)高通量測序使用。

低聚異麥芽糖作為一種健康糖源和功能性食品添加劑廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和飼料添加劑行業(yè)中。在低聚異麥芽糖的制備過程中，α-葡萄糖苷酶的轉(zhuǎn)糖苷作用是關(guān)鍵步驟。目前國內(nèi)用于低聚異麥芽糖生產(chǎn)的α-葡萄糖苷酶大多為進(jìn)口品。本項(xiàng)目獲得的?-葡萄糖苷酶生產(chǎn)菌株發(fā)酵液酶活達(dá)到 11 U/mL，為國內(nèi)外現(xiàn) 有報(bào)道中的最高水平，發(fā)酵工藝簡單易控。重組菌發(fā)酵液經(jīng)過濾除菌并濃縮后可以直接作為酶液進(jìn)行轉(zhuǎn)化。酶轉(zhuǎn)化生產(chǎn)低聚異麥芽糖轉(zhuǎn)化率與進(jìn)口酶相似，可以替代進(jìn)口品。 

CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins)是目前最常用的基因編輯工具酶，在科研領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，而在臨床方面的應(yīng)用因?yàn)槠涿摪谢钚砸欢韧磺啊Ｋㄟ^guide RNA（gRNA）與靶向DNA序列的配對，從而將Cas9錨定在靶向基因并誘導(dǎo)產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂（DSB）。在基因編輯誘發(fā)的DSB的修復(fù)過程中，一定幾率會產(chǎn)生基因突變或者外源DNA片段的插入，從而達(dá)到基因編輯的目的。在實(shí)際應(yīng)用過程中，一個好的基因編輯酶Cas9需要同時滿足高效切割靶位點(diǎn)、低脫靶活性和低染色體異常三個特點(diǎn)。目前在這三個方面，有一部分基于PCR的方法用于估算基因編輯效率，但其結(jié)果可靠性有待提高；有一些基于高通量測序的方法可以在體內(nèi)或者體外檢測基因編輯酶的脫靶活性；尚無系統(tǒng)的可定量的測量基因組異常結(jié)構(gòu)的方法。本項(xiàng)目開發(fā)了一種新的方法，可以用來同時定量檢測Cas9編輯效率和脫靶活性以及編輯引起的染色體異常結(jié)構(gòu)，即primer-extension-mediated sequencing（PEM-seq）。這是對基因編輯和DNA損傷修復(fù)等領(lǐng)域都有巨大促進(jìn)作用的新技術(shù)。與此同時，該項(xiàng)目包括了該團(tuán)隊(duì)利用PEM-seq篩選出的一個相比于現(xiàn)有Cas9變體具有更低脫靶活性且與野生型Cas9切割效率相當(dāng)?shù)腃as9變體further enhanced Cas9 (FeCas9)。